上海信帆生物供應(yīng)葡聚糖凝膠 G 系列產(chǎn)品，使用說(shuō)明如下：

葡聚糖凝膠 G 系列使用說(shuō)明

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。親水基質(zhì)使其非特異性吸附小化，并在生物分子分離期間得到較高的回收率。G 型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

一：使用方法

Sephadex 系列產(chǎn)品以干粉形式存在，使用前必須溶脹，在膨脹期間應(yīng)避免過(guò)度攪拌，因?yàn)樗赡芷茐奶盍希灰褂么帕嚢杵鳌?/span>

1、填料的準(zhǔn)備

（1）將填料在過(guò)量去離子水或緩沖液中，室溫條件下膨脹 24 小時(shí)，或用熱水膨脹 1 小時(shí)。洗脫緩沖液不應(yīng)含有高粘度的試劑。溶脹過(guò)程中，如果上層有漂浮物，請(qǐng)去除。

（2）將溶脹好的填料，所有的緩沖液等材料平衡至實(shí)驗(yàn)操作溫度，對(duì)所有的緩沖液進(jìn)行脫氣處理。

2、裝柱

（1）檢查層析柱所有部件，特別是過(guò)濾網(wǎng)，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。

（2）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

（3）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（4）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的 1.33 倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定（注意壓力不要超過(guò)填 料大耐壓）。

3、平衡

上樣前平衡層析柱至少 5-10 個(gè)柱體積直到記錄儀基線(xiàn)變得平穩(wěn)為止（流出液的 pH 值和電導(dǎo)值等于 上柱的 Buffer 的 pH 值和電導(dǎo)值）。

4、上樣

樣品一定要離心或過(guò)濾后（0.45um 濾膜）上樣。 凝膠過(guò)濾的上樣量一般為不大于 5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在 1-2%的柱床體積，視分 離情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到 20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱子越高，分 離效果相應(yīng)越好，但是，柱高過(guò)高的凝膠柱會(huì)引起較大的反壓，也應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定 柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為 5：1 即可。

5、洗脫方法

可以用無(wú)鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫。

6、在位清洗（CIP）

凝膠使用十次后作一次 CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是用 0.1 M 氫氧化 鈉洗 2 個(gè)柱體積，再以至少 10 個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。

二：保存

未處理的填料，室溫密閉保存。使用完的填料，用純水將鹽分*沖洗，后保存在 20%乙醇中，4℃ 保存。

三：注意事項(xiàng)：

（1）上樣之前，樣品必須經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的 正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過(guò)濾器過(guò)濾。

（2）在使用過(guò)程中，避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于 0.1 摩爾。堿會(huì)使流速變慢。

（3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。

 上海信帆生物供應(yīng)葡聚糖凝膠 G 系列產(chǎn)品。